植物细胞与组织研究方法第2版 毕建杰 理论实验技术课程 植物细胞组织研究应用技术方法 高等农林院校植物生产类本科生研究生

植物细胞与组织研究方法（第2版）

毕建杰、何在菊、谭秀山 主编

开本:16

ISBN：9787122470591

化学工业出版社

内容简介

植物细胞与组织研究是生物类、大农学类专业本科生、研究生的一门重要的理论与实验技术相结合的课程。本书是编者根据多年积累的教学、科研经验以及实验技能整理而成，主要介绍了植物细胞与组织研究中广泛应用的技术和方法，共3篇8章，即植物细胞与组织制片原理、植物细胞与组织制片方法和技术、植物组织与细胞研究实验操作3篇内容，包括植物制片的目的和方法、植物制片的原理、常用染色剂及染色方法、石蜡切片法、半薄切片技术、非切片制片、植物细胞与组织显微测定、其它切片技术。根据时代发展和课程建设对学生实验能力的要求，相较第1版，本次修订补充了26个植物组织与细胞研究实验操作内容。全书图文并茂，既系统地介绍了当前植物细胞与组织的研究方法，又突出了实验技术要点。
本书可作为高等农林院校植物生产类各专业的本科生、研究生的教材，也可供综合性大学、师范类大学生物类各专业师生及生物学相关工作者或爱好者参考。

作者简介

1.毕建杰， 男 ，汉族，山东荣成人，硕士研究生，山东农业大学农学院作物科学实验教学高 级实验师，小麦育种全国研究人员、高 级实验师，农业生物学国家 级实验教学示范中心高 级实验师，科技部科技项目网评专家，山东省高等学校创新创业指导注册师资，担任农业农村部主管《农业科技通讯》刊物编委，教育部主管《中国现代教育装备》杂志专家委员会委员。主要研究方向：高等教育理论、作物栽培学、农业干旱监测技术等；主持国家科技部等国家 级科研课题6项，获山东省教育厅高等学校科技成果一等奖1项，山东省泰安市科技进步一等奖1项，山东省省级教学成果一等奖1项、山东省省级教学成果二等奖1项，发表SCI文章15篇，授权国家发明专利30余项，主编副主编普通高等教育十一五、十二五规划教材著作5部，2024年获批主编山东农业大学数字教材《植物细胞与组织研究方法》，2024年申请化学工业出版社数字教材并立项，参编教材著作9部。主讲课程《种子市场营销学》、《种子综合实验技术》、《植物细胞与组织研究方法》、《现代仪器分析教程》等6门课程。
2.何在菊，女，汉族，山东临沂人，硕士研究生，山东农业大学农学院作物科学实验教学中心实验师，小麦育种全国研究人员、实验师，农业生物学国家 级实验教学示范中心实验师，学院教工支部书记，泰安市专业技术拔尖人才，主要研究方向高等教育管理、作物栽培学等，主持校级教学研究项目2项，参加5项，获校级教学成果二等奖3项，作为主要成员参加国家自然科学基金项目3项。作为毕建杰老师团队成员，副主编《种子市场营销学》数字教材1部，第 二主编编写化学工业出版社拟出版的教材2部、数字教材1部，主讲课程《种子综合实验技术》等。
3.谭秀山，男，汉族，山东临朐人，硕士研究生，高 级农艺师，山东省泰安市雨阳农业科技发展有限公司副总，山东农业大学校外导师，主要研究方向植物组织培养与工厂化育苗技术。山东省科技特派员，作为毕建杰老师团队成员，参编《种子市场营销学》数字教材（毕建杰主编），参编《植物细胞与组织研究方法》（毕建杰主编，十二五普通高等学校规划教材，化学工业出版社出版），主持山东省科技发展计划项目1项、山东省泰安市科技发展计划项目2项，参入国家 级科研项目3项，授权国家专利2项。发表中文文章36篇，讲授课程《植物细胞与组织研究方法》。

前 言

植物细胞与组织的研究是一门理论与实践紧密结合的实验生物学课程。随着生命科学的发展以及学科间的交叉与渗透，植物细胞与组织的研究不仅是经典植物学研究的必备技术，而且已成为现代遗传学、现代园艺学、分子生物学、植物与微生物分子互作等研究的重要技术。
近年来，编者对该课程的教学体系、教学条件、教学内容和教学方法等做了相应的调整和补充，以全面提高在校本科生、研究生的实践能力，帮助学生在理解实验原理的基础上熟练掌握实践操作关键技术，培养学生的综合分析能力。
本书在内容上既反映了显微技术的较新成就，又注重切合当前教学的实际需要。第1篇介绍了植物细胞与组织制片的基本原理，如制片原理、制片过程、染色原理、染色过程等内容。第2篇介绍了常用的植物细胞与组织制片方法和技术，如传统的切片技术（如石蜡切片、徒手切片、半薄切片等）、非切片技术（涂压制片、整体制片、透明制片、离析制片等），植物显微化学相关原理、技术［如细胞壁成分显示与测定、蛋白质显示与测定、脂类显示与测定、核酸（DNA）显示与测定、糖类染色与测定等］，现代植物生理学、遗传学等相关领域的部分研究技术，如细胞器（叶绿体、线粒体、液泡）分离、染色、观察技术及DNA显色分析技术等。第3篇介绍了26个植物组织与细胞研究的实验操作技术，简略介绍了部分植物组织与细胞的切片、染色、观察、化学测定等实验操作过程，涉及徒手切片、石蜡切片、半薄切片等切片技术；撕片、离析、涂片、培养等非切片技术；临时制片观察技术、永久制片技术；常规番红固绿染色、PAS染色、组织化学染色等实验室常用技术。研究对象包含了植物根、茎（草本茎、木本茎）、叶、花、果实、种子，花粉、子房、胚囊、叶脉、维管束、胞间连丝，细胞壁、液泡、叶绿体、线粒体、淀粉粒，细胞壁纤维素、果胶质、蛋白质、脂类、DNA、酶等，涉及器官、组织、细胞、细胞器、化学成分等。
本书内容丰富，基本汇集了经典植物细胞学、细胞生物学及植物细胞工程中常用的研究方法，可作为高等农林院校大农学类、生物学相关专业本科生、研究生教材，也可作为综合性大学、师范类大学生物学相关专业师生的参考教材。
由于编者水平有限，书中难免有疏漏之处，敬请读者批评指正。
编者
2024年10月

目 录

第1篇植物细胞与组织制片原理 1
第1章植物制片的目的和方法 2
1.1植物制片简介 2
1.1.1植物制片目的 2
1.1.2植物制片方法 2
1.2植物制片常用仪器、用具、药品 3
1.2.1主要仪器设备 3
1.2.2主要玻璃器具 6
1.2.3一般用具 7
1.3植物制片一般流程 7
1.3.1一般制片 7
1.3.2石蜡 半薄切片 8
1.4植物制片相关常用技术 8
1.4.1清洁技术 8
1.4.2封边与封片（藏）技术 9
1.4.3切片刀的磨刀技术 9
第2章植物制片的原理 11
2.1选材 11
2.1.1材料的选择 11
2.1.2材料的切取 11
2.2杀死、固定与保存 13
2.2.1杀死、固定与保存概述 13
2.2.2固定的基本原理 13
2.2.3常用的固定剂 14
2.2.4固定操作注意事项 21
2.3洗涤 22
2.3.1洗涤的作用 22
2.3.2洗涤的方法 23
2.4脱水剂与脱水 23
2.4.1脱水 23
2.4.2常用的脱水剂 23
2.5透明剂与透明 25
2.5.1透明的作用 25
2.5.2常用的透明剂 25
2.6制片 26
2.7染色剂与染色 26
2.7.1染色的发现与染色原理 26
2.7.2染色剂的概念与性质 27
2.7.3染色剂的种类 28
2.8封固与封固剂 29
2.8.1水溶性封固剂 29
2.8.2糖浆封固剂 29
2.8.3树脂性封固剂 29
2.8.4其它封固剂 30
第3章常用染色剂及染色方法 31
3.1常用染色剂 31
3.1.1苏木精 31
3.1.2洋红 34
3.1.3番红O 36
3.1.4亮绿 36
3.1.5固绿 37
3.1.6孔雀绿 37
3.1.7甲基绿 37
3.1.8碘绿 38
3.1.9结晶紫 38
3.1.10橘红G 38
3.1.11曙红 39
3.1.12真曙红 39
3.1.13中性红 39
3.1.14酸性品红（复红） 40
3.1.15碱性品红（复红） 40
3.1.16刚果红 40
3.1.17甲苯胺蓝 41
3.1.18甲基蓝 41
3.1.19亚甲基蓝 42
3.1.20苏丹Ⅲ 42
3.1.21苏丹Ⅳ 42
3.1.22苯胺蓝 42
3.1.23地衣红 43
3.1.24天青石蓝 43
3.1.25苦味酸 43
3.1.26俾斯麦棕 43
3.1.27玫瑰红 44
3.1.28詹纳斯绿 44
3.1.29红四氮唑 44
3.1.30间苯三酚 45
3.2染色方法 45
3.2.1染色方法的种类 45
3.2.2常用的染色方法与步骤 46
3.3染色中必须注意的几个问题 55
3.3.1染色液浓度 55
3.3.2染色温度与时间 55
3.3.3固定液对于染色的影响 55
3.3.4染色时应注意的几个问题 55
第2篇植物细胞与组织制片方法和技术 56
第4章石蜡切片法 57
4.1取材、固定、保存、洗涤 57
4.1.1取材 57
4.1.2固定 57
4.1.3冲洗 57
4.2脱水、透明 58
4.2.1脱水 58
4.2.2透明 59
4.3浸蜡 60
4.4包埋 60
4.4.1包埋方法 60
4.4.2包埋石蜡选择 61
4.5修块、切片 61
4.5.1修块、粘固 62
4.5.2组织切片机的结构及操作步骤 62
4.5.3切片注意事项 64
4.6粘片、展片、烤片（烘片） 65
4.7脱蜡、复水、染色、脱水、透明 66
4.8封片 66
第5章半薄切片技术 68
5.1水溶性树脂包埋 68
5.1.1GMA包埋法 68
5.1.2Quetol 523包埋 71
5.1.3JB-4包埋 71
5.1.4Lowicryl K4M包埋法 73
5.2环氧树脂包埋法 73
5.2.1环氧树脂包埋的机制和配方 73
5.2.2材料洗涤、脱水 76
5.2.3渗透与聚合 76
5.3修块和切片 76
5.3.1修块 76
5.3.2切片刀 77
5.3.3切片注意事项 77
5.4染色 77
第6章非切片制片 79
6.1暂时封藏 79
6.1.1简易观察制片 79
6.1.2孢子及花粉粒萌发观察制片 79
6.2整体制片 80
6.2.1甘油法 80
6.2.2甘油冻胶法 81
6.2.3甘油-二甲苯法 81
6.2.4糖浆法 82
6.2.5水封藏法 82
6.2.6松节油法 82
6.3涂压制片 83
6.3.1涂压法的基本步骤 83