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醉染图书SNX13与心力衰竭的关系及其机制研究9787560868387
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总序
论丛前言
前言
英语缩写一览表
章 引言
1.1 概述
1.2 Sorting nexins家族与人类疾病
1.2.1 内小体
1.2.2 PX结构域
l.. Sorting nexins家族
1.2.4 Sorting nexins家族与人类疾病
1.2.5 本章小结
第2章 SNX13与心力衰竭的关系
2.1 材料和仪器
2.1.1 临床病例标本
2.1.2 实验动物
2.1.3 主要试剂
2.1.4 主要仪器
2.1.5 PCR引物序列
2.2 实验方法
2.2.1 组织RNA提取
2.2.2 RNA逆转录
2.. 定量PCR
2.2.4 小鼠心衰模型的建立
2.2.5 小动物心脏超声
2.2.6 Western Blot免疫印迹
2.2.7 统计学分析
. 结果
..1 人心力衰竭心肌组织中SNX13的mRNA水平显著下调
..2 人心力衰竭心肌组织中SNX13的蛋白水平显著下调
.. TAC小鼠心肌组织中SNX13的表达水平显著下调
2.4 讨论
第3章 SNX13敲除引起心力衰竭的病理生理机制
3.1 材料和仪器
3.1.1 实验动物
3.1.2 主要试剂
3.1.3 主要仪器
3.2 实验方法
3.2.1 信息学预测
3.2.2 分离成年斑马鱼各器官组织
3.. 斑马鱼胚胎整体原位杂交
3.2.4 斑马鱼Morpholino显微注
3.2.5 斑马鱼胚胎western blot
3.2.6 斑马鱼胚胎mRNA分析
3.2.7 斑马鱼胚胎HE染色
3.2.8 共聚焦显微镜记录心功能
3.2.9 显微镜成像
3.2.10 吖啶橙染色
3.2.11 Caspase 3免疫组化荧光染色
3.2.12 新生大鼠心肌细胞分离与转染
3.2.13 心肌细胞RNA分析
3.2.14 心肌细胞western blot
3.2.15 DNA ladder实验
3.2.16 病毒载体构建与感染
3.2.17 流式细胞仪检测凋亡
3.2.18 线粒体组分分离
3.2.19 统计学分析
3.3 结果
3.3.1 斑马鱼SNX13敲除后出现心脏功能异常
3.3.2 斑马鱼SNX13敲除后的心肌组织出现自噬现象和凋亡
3.3.3 SNX13敲除的新生大鼠心肌细胞发生凋亡
3.3.4 SNX13敲除后诱发外源凋亡途径
3.4 讨论
3.4.1 SNX13敲除模式动物的建立
3.4.2 SNX13敲除的斑马鱼发生了心衰
3.4.3 SNX13敲除致心肌细胞凋亡
3.4.4 SNX13敲除诱发细胞外源凋亡途径
第4章 SNX13介导心肌细胞凋亡的机制
4.1 材料和仪器
4.1.1 实验动物
4.1.2 主要试剂
4.1.3 主要仪器
4.2 实验方法
4.2.1 组织/细胞Western blot
4.2.2 新生大鼠心肌细胞分离与转染
4.. 心肌细胞RNA分析
4.2.4 蛋白酶活检测
4.2.5 病毒载体构建与转染
4.2.6 流式细胞仪凋亡检测
4.2.7 mRNA体外转录
4.2.8 显微注
4.2.9 免疫共沉淀(CO-IP)
4.2.10 细胞免疫荧光染色
4.2.11 早期内小体组分分离
4.2.12 H9C2细胞培养
4.2.13 缺失突变体构建
4.2.14 细胞cAMP检测
4.2.15 荧光能量共振转移(FRET)
4.2.16 统计学分析
4.3 结果
4.3.1 SNX13敲除会下肌特异抗凋亡分子ARC蛋白的表达
4.3.2 SNX13敲除加速了ARC蛋白的溶酶体降解途径
4.3.3 SNX13缺失引起的凋亡和心力衰竭缘于ARC蛋白水平的下调
4.3.4 SNX13通过内小体系统调控ARC的胞内
4.3.5 SNX13通过PXA结构域介导ARC的胞内
4.4 讨论
4.4.1 SNX13敲除致ARC表达下调
4.4.2 SNX13敲除后ARC的溶酶体途径降解
4.4.3 SNX13敲除后凋亡和心力衰竭的机制是ARC的下调
4.4.4 SNX13调控ARC的转位
4.4.5 SNX13通过PXA结构域与ARC作用
第5章 结论与展望
5.1 结论
5.2 进一步工作
参考文献
后记
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