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音像SNX13与心力衰竭的关系及其机制研究李长明,陈义汉
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总序论丛前言前言英语缩写一览表章 引言1.1 概述1.2 Sorting nexins家族与人类疾病1.2.1 内小体1.2.2 PX结构域l.. Sorting nexins家族1.2.4 Sorting nexins家族与人类疾病1.2.5 本章小结第2章 SNX13与心力衰竭的关系2.1 材料和仪器2.1.1 临床病例标本2.1.2 实验动物2.1.3 主要试剂2.1.4 主要仪器2.1.5 PCR引物序列2.2 实验方法2.2.1 组织RNA提取2.2.2 RNA逆转录2.. 定量PCR2.2.4 小鼠心衰模型的建立2.2.5 小动物心脏超声2.2.6 Western Blot免疫印迹2.2.7 统计学分析. 结果..1 人心力衰竭心肌组织中SNX13的mRNA水平显著下调..2 人心力衰竭心肌组织中SNX13的蛋白水平显著下调.. TAC小鼠心肌组织中SNX13的表达水平显著下调2.4 讨论第3章 SNX13敲除引起心力衰竭的病理生理机制3.1 材料和仪器3.1.1 实验动物3.1.2 主要试剂3.1.3 主要仪器3.2 实验方法3.2.1 信息学预测3.2.2 分离成年斑马鱼各器官组织3.. 斑马鱼胚胎整体原位杂交3.2.4 斑马鱼Morpholino显微注3.2.5 斑马鱼胚胎western blot3.2.6 斑马鱼胚胎mRNA分析3.2.7 斑马鱼胚胎HE染色3.2.8 共聚焦显微镜记录心功能3.2.9 显微镜成像3.2.10 吖啶橙染色3.2.11 Caspase 3免疫组化荧光染色3.2.12 新生大鼠心肌细胞分离与转染3.2.13 心肌细胞RNA分析3.2.14 心肌细胞western blot3.2.15 DNA ladder实验3.2.16 病毒载体构建与感染3.2.17 流式细胞仪检测凋亡3.2.18 线粒体组分分离3.2.19 统计学分析3.3 结果3.3.1 斑马鱼SNX13敲除后出现心脏功能异常3.3.2 斑马鱼SNX13敲除后的心肌组织出现自噬现象和凋亡3.3.3 SNX13敲除的新生大鼠心肌细胞发生凋亡3.3.4 SNX13敲除后诱发外源凋亡途径3.4 讨论3.4.1 SNX13敲除模式动物的建立3.4.2 SNX13敲除的斑马鱼发生了心衰3.4.3 SNX13敲除致心肌细胞凋亡3.4.4 SNX13敲除诱发细胞外源凋亡途径第4章 SNX13介导心肌细胞凋亡的机制4.1 材料和仪器4.1.1 实验动物4.1.2 主要试剂4.1.3 主要仪器4.2 实验方法4.2.1 组织/细胞Western blot4.2.2 新生大鼠心肌细胞分离与转染4.. 心肌细胞RNA分析4.2.4 蛋白酶活检测4.2.5 病毒载体构建与转染4.2.6 流式细胞仪凋亡检测4.2.7 mRNA体外转录4.2.8 显微注4.2.9 免疫共沉淀(CO-IP)4.2.10 细胞免疫荧光染色4.2.11 早期内小体组分分离4.2.12 H9C2细胞培养4.2.13 缺失突变体构建4.2.14 细胞cAMP检测4.2.15 荧光能量共振转移(FRET)4.2.16 统计学分析4.3 结果4.3.1 SNX13敲除会下肌特异抗凋亡分子ARC蛋白的表达4.3.2 SNX13敲除加速了ARC蛋白的溶酶体降解途径4.3.3 SNX13缺失引起的凋亡和心力衰竭缘于ARC蛋白水平的下调4.3.4 SNX13通过内小体系统调控ARC的胞内4.3.5 SNX13通过PXA结构域介导ARC的胞内4.4 讨论4.4.1 SNX13敲除致ARC表达下调4.4.2 SNX13敲除后ARC的溶酶体途径降解4.4.3 SNX13敲除后凋亡和心力衰竭的机制是ARC的下调4.4.4 SNX13调控ARC的转位4.4.5 SNX13通过PXA结构域与ARC作用第5章 结论与展望5.1 结论5.2 进一步工作参考文献后记
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