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音像实用神经变疾病物学实验方与技潘晓东 主编
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章原代神经细胞培养和细胞功能测定/1
节原代皮质和海马神经元培养1
第二节新生小鼠中脑多巴胺能神经元培养3
一、单层皮质星形胶质细胞表面培养新生鼠中脑多巴胺能神经元3
二、单层星形胶质细胞表面培养新生鼠中脑多巴胺能神经元及形成
神经突触9
三、本节实验中使用到的试剂和溶液11
四、注意事项13
五、常见问题及解决方案13
六、预期结果13
七、时间因素14
第三节小鼠神经干细胞培养14
一、成年鼠神经干细胞培养14
二、新生鼠海马神经干细胞的培养19
三、胎鼠神经干细胞的培养20
第四节原代神经胶质细胞培养21
一、星形胶质细胞的分离和培养21
二、新生鼠小胶质细胞的原代培养
三、成年鼠小胶质细胞的分离和培养25
第五节小胶质细胞功能实验29
一、趋化和迁移实验29
二、体外测定小胶质细胞吞噬功能(吞噬尼罗红微球/a突触核蛋白/Ab)30
第二章模式动物行为学实验/34
节Morris水迷宫34
第二节Y-迷宫36
第三节小鼠平衡功能实验39
第四节抑郁模型的建立和评定40
一、抑郁症的模型制作41
二、抑郁动物的行为学评价45
第五节嗅觉行为功能测定47
一、埋藏食物小球实验48
二、嗅觉迷宫48
第六节大脑中动脉闭塞模型的建立和评定49
第七节运动功能评定52
一、小鼠肢体力量测试实验——小鼠抓力测试52
二、小鼠耐力测试实验——跑台实验53
第八节感觉(痛触觉)系统评估54
一、VonFreyTest54
二、智能热板仪56
三、甩尾实验57
第三章神经病理学实验/59
节脑组织的取材、保存和标本制作59
第二节脊髓组织的取材、保存和标本制作62
一、脊髓的取材和保存62
二、脊髓冰冻切片的制作64
第三节小鼠脑脊液采集66
第四节海马脑片场电位的神经电生理记录方法67
第五节神经免疫组织化学和免疫荧光染色71
第六节透视电镜标本制作74
第七节老化组织相关病理特殊染色(SA-b-gal、银染色)77
一、神经原纤维缠结(NFTs)染色77
二、b-淀粉样蛋白染色80
三、衰老相关b-半乳糖苷酶染色82
第八节神经组织高尔基染色83
第九节神经组织体视学分析技术86
第十节共聚焦扫描及定量技术92
一、激光共聚焦显微镜的成像原理92
二、激光共聚焦显微镜在神经变疾病研究中的运用93
三、激光共聚焦显微镜结构95
四、基本扫描及图像获取95
五、微分干涉差(DIC)扫描及图像获取102
六、拼图扫描及图像获取103
七、Z-Stack扫描及图像获取103
八、时间序列扫描105
九、激光共聚焦图像定量及后处理106
第四章神经生化和基因检测/115
节转基因动物的基因型鉴定、保种和管理115
一、小鼠生殖生理115
二、小鼠的生长周期116
三、基因工程鼠饲养繁殖般程和注意事项116
四、常用小鼠品系的概况117
五、几种常用神经变疾病转基因鼠的介绍和鉴定118
第二节神经组织蛋白检测125
一、蛋白质印迹法125
二、免疫共沉淀原理及步骤130
三、动物脑组织匀浆检测Ab132
第三节RNA提取及实时荧光定量PCR技术134
一、RNA提取134
二、RT-PCR135
三、qPCR135
第四节基因芯片检测140
一、单核苷酸多态芯片实验140
二、基因表达谱芯片检测142
第五节荧光素酶报告基因技术分析启动子转录活143
第六节荧光定量PCR法检测端粒酶活146
第七节中枢神经系统突触和非突触线粒体的分离提取148
第五章分子影像技术检测神经变疾病/157
节PET/SPECT-CT显像探针的制备158
第二节fMRI成像技术的原理及其实验设与据处理164
一、fMRI实验设计164
二、实验设备166
三、实验数据处理166
四、fMRI实验相关的准备169
五、小结170
第六章神经变疾病患者临床神经评估、样本保存和数据库建设/171
节神经变疾病临床登记和数据库建立和实施171
一、临床研究目标的确立171
二、研究方案的确立172
三、组织机构的建立173
四、病例报告表(CRF)的建立174
第二节神经变疾病患者血液、脑脊液组织样本的保存和处理177
一、血液及血液成分的处理和保存178
二、脑脊液的处理和保存179
三、标本DNA的提取和保存180
附表6-1标本保存详细记录180
附表6-2关于使用组织样开展学研究的知情同意书181
第三节神经心理认知障碍测试诊断系统182
一、医生端系统182
二、用户管理183
三、临床病例登记183
四、案例管理186
五、统计打印190
六、量表管理191
第七章神经生物学常用分析及作图软件的应用/193
节ImageJ神经生物分析软件的应用193
一、ImageJ神经生物分析软件的基本功能193
二、ImageJ神经生物分析软件分析免疫荧光定量技术197
第二节GraphpaPis6.0作图和统计应用205
一、折线图205
二、直条图208
三、生存曲线图216
四、散点图219
五、饼图225
第三节Logistic回归、Cox风险模型以及Kaplan-Meier曲线的统计应用1
一、Logistic回归分析和ROC工作曲线的制订1
二、Cox回归分析
三、Kaplan-Meier曲线分析242
第四节EndNote×7的应用245
一、文献管理245
二、撰写245
潘晓东,医学博士,副主任医师、副教授、博士生导师。福建省老年医学研究所副所长,福建省医学会神经病学分会秘书及青年委员、神经变学组成员;福建省青年科学家学会成员;中国老年医学学会认知障碍分会委员会委员;中国研究型医院学会神经科学专业委员会委员;美国国立卫生研究院(NIH)/美国国立老化研究所(NIA)访问学者。
专业方向:阿尔茨海默病、帕金森病等老年神经变疾病的基础和临床研究。近年主持承担3项自然科学及多项省厅级课题;发表SCI及论10余篇;主编专著2部。开发记忆障碍测试系统软件,建成神经认知心理障碍疾病诊断平台,获软件著作权1项、申请1项。2011年获“福建青年科技奖”、2013年获“福建运盛青年科技奖”荣誉。
实验流程严格按照美国国立卫生研究院(NIH)、国立老化研究所(NIA)的标准、规范执行
包括实验技术的概述,材料准备、操作步骤、操作指导、思考、注意事项(包括实验结果不是想要的时的应急预案)、失败的经验或成功的经验总结等
图文结合介绍Image J 神经生物分析软件、GraphPad Prism 6.0软件、SPSS软件的应用
按本书的指导,可以提高实验效率,分析统计实验结果。
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