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音像转基因猪制备技术魏庆信,郑新民 编
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序前言章 概述节 转基因动物的产生和发展一、转基因动物的产生二、动物转基因技术的发展三、转基因动物应用领域的拓展第二节 转基因猪技术现状及应用前景一、转基因猪技术现状二、转基因猪的应用现状与前景参考文献第二章 猪的配子与胚胎操作技术节 猪的采集、保存和输精技术一、猪的采集二、的质量检查和评定三、的保存四、输精技术第二节 母猪的同期发情和超数排卵技术一、母猪的同期发情技术二、母猪的超数排卵技术第三节 猪胚胎的采集和移植技术一、胚胎的采集二、胚胎的移植第四节 猪卵母细胞体外成熟及体外受精技术一、猪卵母细胞的采集二、猪卵母细胞的体外成熟三、猪精子的体外获能四、体外受精技术五、胞质内单精注技术第五节 猪体细胞核移植(克隆)技术一、供体细胞的选择二、供体细胞的制备方法三、受体细胞的制备四、核移植操作技术五、融合及激活技术六、手工克隆技术七、重构胚的培养八、重构胚的移植九、猪体细胞核移植存在的问题及应用前景第六节 猪的i术一、iPS细胞的制备技术二、猪i术的应用前景三、iPS细胞目前存在的问题第七节 配子与胚胎操作的环境控制一、影响配子与胚胎操作的环境因素二、技术三、玻璃及塑料制品的清洗四、配子与胚胎操作室的设计及环境管理参考文献第三章 猪的基因工程技术节 转基因猪表达载体的构建一、目的基因及其全长序列的获取二、启动子的选择三、报告基因四、调控元件五、动物基因工程常用载体六、载体构建的般程第二节 基因打靶技术及其策略一、基因打靶载体的类型和构建方法二、胚胎干细胞基因打靶三、体细胞基因打靶四、基因打靶技术的发展及复杂调控五、基因打靶技术的应用和展望第三节 RNAi基因沉默载体的构建一、RNAi的研究二、RNAi的分子机制三、shRNA表达载体构建四、基因沉默技术在猪遗传改良上的应用第四节 猪基因组靶向修饰技术一、锌指核酸酶二、TALEN三、PhiC31整合酶参考文献第四章 猪的转基因技术节 显微注法一、原核胚的获取二、基因的显微注三、注胚的移植四、原核注法制备转基因猪的效率五、提高转基因效率的措施六、通过显微注法实现基因的定位修饰和整合第二节 猪精子介导法一、精子介导转基因的机理二、精子介导制备转基因猪的方法第三节 体细胞核移植介导法一、供体细胞的选择及建系二、细胞的基因转染三、细胞筛选和阳单克隆培养第四节 逆转录病毒感染法一、逆转录病毒载体的构建二、利用逆转录病毒载体制备转基因猪的路径第五节 制备转基因猪的方法一、精原干细胞途径二、人工染色体技术参考文献第五章 转基因猪的检测节 可视化识别检测一、荧光标记二、肤色标记第二节 整合检测一、样品的采集二、DNA的提取三、聚合酶链式反应(PCR)四、DNA斑点杂交五、Southerln印记杂交六、外源基因整合位点的检测――染色体原位杂交技术七、转基因整合拷贝数的测定第三节 转基因猪外源基因的转录分析――mRNA检测一、组织或细胞中总RNA提取二、Northern印迹杂交三、RNase保护分析四、逆转录一聚合酶链式反应(RT―PCR)五、RNA斑点杂交第四节 转基因猪翻译水平――蛋白质产物检测一、蛋白质印迹技术二、免疫组织化学检测第五节 转基因猪表达产物的生物活分析及功能测试一、表达产物的生物活分析二、表达产物的功能测试参考文献第六章 转基因猪的安全调控技术节 转基因猪的安全分析及解决方案一、转基因猪对食品均安全分析及解决方案二、转基因猪对环境的安全分析及解决方案三、转基因猪自身的安全分析及解决方案第二节 标记基因的删除技术一、hit and run法二、双置换法三、位点特异重组技术第三节 组织特异表达第四节 外源基因的诱导表达一、四环素诱导表达系统二、蜕皮激素诱导表达系统三、他克莫司/雷帕霉素诱导系统四、RU486诱导系统参考文献第七章 转基因猪新品种培育节 外源基因在G0代中的整合状况及遗传稳定一、随机整合二、定位整合第二节 G0代转基因猪的选择一、选择的内容和目标二、选择程序第三节 转基因猪纯合子的建立一、通过常规繁育技术建立转基因猪纯合子二、通过重复打靶技术建立转基因猪纯合子三、基因编辑技术第四节 转基因猪新品种的培育一、转基因猪新品种的培育目标二、转基因猪新品系的建立三、转基因猪新品种的建立四、转基因猪新品种的利用五、转基因猪种质资源的保存参考文献第八章 转基因猪的安全管理和安全评价节 我国农业转基因生物的安全管理体系一、我国农业转基因生物安全管理的法规建设二、我国农业转基因生物的管理和监控体系第二节 转基因猪的安全控制一、转基因实验猪场的安全控制二、转基因实验猪场的卫生防疫三、转基因实验猪场猪群处置规则第三节 转基因猪的安全评价一、转基因猪安全评价的内容二、各阶段的申报程序参考文献
魏庆信,男,1945年出生,1970年北京农业大学畜牧专业,现为湖北省农业科学院畜牧兽医研究所研究员。长期从事动物繁殖研究和技术推广,从20世纪90年代后期开始转基因动物研究,先后承担“863计划”、自然科学、转基因生物新品种培育专项和湖北省科技厅等的相关研究课题20余项,在靠前率先建立猪胚胎移植、猪微注胚胎自体移植和猪胚胎细胞核移植等技术,较早建立了转基因猪工作平台和技术体系,先后获得生长激素、人类促衰变因子、抗猪瘟病毒、人血清白蛋白及ω—3脂肪酸去饱和酶等多种转基因猪。郑新民,男,1960年出生,1992年西北农业大学动物遗传育种专业硕士,1996—1998年作为访问学者在美国奥本大学农学院动物基因工程实验室工作。现任湖北省农业科学院畜牧兽医研究所研究员、副所长,动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室主任。先后承担“863计划”、自然科学、转基因生物新品种培育专项和湖北省科技厅等的有关转基因动物的研究课题10佘项,建立了相关的基因构建、转基因、分子检测等技术体系,在靠前率先获得高表达的人血清白蛋白、sFatI和IGF基因猪,获多项发明。
《转基因猪制备技术》由魏庆信、郑新民主编,该书从猪配子与胚胎操作和基因工程等两项基础技术入手,系统地阐述了转基因猪的构建、转基因猪的检测、安全调控、安全管理及新品种培育等理论和方法,其内容既有编著者自身研究工作所形成的成果,也包涵了目前靠前外该领域近期新的理论和技术。
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