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音像PCR原理方法及应用(第3版)(精)/生物实验室系列王恒樑 编
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章绪论001节PCR发展简史001第二节PCR技术的基本原理和操作002一、PCR的基本原理002二、PCR的基本成分002三、PCR的基本操作005第三节PCR的主要应用006一、基础研究方面的应用006二、临床上的应用007三、在法医学中的应用008四、在方面的应用008参考文献009第二章扩增已知序列两侧DNA的PCR011节反向PCR011一、引言011二、基本原理011三、材料012四、方法013五、注意事项014六、应用015七、小结017第二节锚定PCR018一、引言018二、原理018三、用连接锚定PCR从基因文库中扩增已知基因侧翼序列020四、用互补锚定PCR直接扩增已知序列侧翼cDNA序列021五、问题及对策025六、小结026第三节RACE——cDNA末端的快速扩增027一、引言027二、RACE基本原理028三、实验方案030四、RACE的应用033五、小结034第四节连接介导的PCR034一、引言034二、原理034三、材料035四、操作步骤035五、注意事项038六、应用039七、小结042第五节Bubble-PCR042一、引言042二、原理042三、材料与方法043四、注意事项044五、应用045六、小结045参考文献045第三章巢式PCR048节常规巢式PCR048一、引言048二、原理048三、材料049四、方法049五、注意事项050六、应用与小结050第二节半巢式PCR050一、引言050二、材料050三、方法051四、注意事项051五、应用与小结052第节转录巢式PCR052一、引言052二、材料052三、方法052四、注意事项054五、应用054第四节共有序列巢式PCR054一、引言054二、材料055三、方法055四、注意事项056五、应用与小结056第五节种特异巢式PCR056一、引言056二、材料057三、方法057四、注意事项058五、应用与小结058第六节巢式PCR-变梯度凝胶电泳058一、引言058二、材料059三、方法059四、注意事项060五、应用与小结060第七节巢式PCR-限制片段长度多态061一、引言061二、材料061三、方法062四、注意事项063五、应用与小结063参考文献063第四章实时荧光定量PCR065节实时荧光定量PCR原理065一、引言065二、概念及原理065第二节实时荧光定量PCR中的荧光化学物质067一、引言067二、荧光染料067三、水解探针068四、分子信标069五、双杂交探针071六、复合探针071第三节实时荧光定量PCR的定量方法072一、定量072二、相对定量073第四节实时荧光定量PCR的实验方法076一、实时荧光定量PCR076二、实时定量RT-PCR079三、多重实时定量PCR081四、多重实时定量RT-PCR084五、实验方案的优化086六、实践中应注意的问题087第五节实时荧光定量PCR技术的应用088一、在病原体检测中的应用089二、在肿瘤研究中的应用090三、在基因表达研究中的应用092四、在细胞因子表达分析中的应用092五、在遗传学及SNP分析上的应用092六、小结093参考文献094第五章致突变PCR097节利用易错DNA聚合酶进行随机突变098一、原理098二、实验方案098三、注意事项100四、讨论100五、应用101第二节利用PCR引物构建位点特异突变体102一、方法1:利用重叠延伸PCR构建定点突变体102二、方法2:利用大引物PCR构建定点突变体105三、方法3:利用重组PCR进行扫描突变107四、讨论111五、应用112六、小结113参考文献113第六章测定基因突变的PCR115节多重PCR115一、引言115二、原理116三、材料116四、方法116五、常见问题的解决120六、应用121七、小结128第二节常用的等位基因特异PCR128一、引言128二、原理129三、材料130四、方法130五、注意事项131六、对等位基因特异PCR的改进131七、应用与小结132第三节简单等位基因辨别PCR133一、引言133二、原理133三、材料134四、方法135五、注意事项136六、应用与小结136第四节L-DNA标记的等位基因特异PCR136一、引言136二、原理137三、材料137四、方法138五、注意事项139六、应用与小结139第五节同源一步荧光等位基因特异PCR139一、引言139二、原理139三、材料140四、方法141五、注意事项142六、应用与小结142第六节低温变共扩增PCR142一、引言142二、原理143三、材料144四、方法144五、小结145第七节限制片段长度多态PCR145一、原理145二、材料145三、操作方法146四、注意事项147五、应用148第八节PCR-变梯度凝胶电泳149一、原理149二、材料149三、操作方法149四、注意事项151五、应用151参考文献152第七章测序和DNA合成PCR156节不对称PCR156一、引言156二、引物浓度不对称PCR156三、热(引物长度)不对称PCR158四、应用162五、小结163第二节PCR测序法164一、直接测序法164二、循环测序法165三、全自动DNA测序法167四、应用167第三节乳化液PCR168一、引言168二、原理168三、材料和方法169四、应用177五、小结177第四节基于PCR的大片段DNA的合成177一、引言177二、基本原理178三、目的序列、寡核苷酸和测序引物的设计178四、操作步骤180五、DNA合成时常出现的问题及解决办法184六、小结184参考文献184第八章免疫PCR188节免疫PCR技术188一、引言188二、基本原理188三、材料和试剂190四、方法191五、注意事项196六、应用197七、小结198第二节免疫捕捉PCR198一、引言198二、基本原理198三、材料199四、方法199五、注意事项201六、应用202七、小结204第三节PCR-ELISA205一、引言205二、原理205三、材料206四、方法207五、注意事项208六、应用208七、小结211第四节原位PCR211一、引言211二、基本原理211三、原位PCR方法分类及其设计方案212四、原位PCR基本步骤214五、原位PCR方法的选择216六、原位PCR操作注意事项217七、原位PCR存在的问题和结果分析218八、原位PCR的应用219九、原位PCR操作程序示例220十、小结222参考文献2第九章PCR芯片227节PCR芯片的结构及其工作原理227一、引言227二、原理227三、方法0四、应用0五、小结1第二节纳升高通量PCR1一、引言1二、原理2三、材料2四、方法五、注意事项六、应用4七、小结4第三节微流控PCR4一、引言4二、原理5三、材料(以不对称螺旋管芯片微流控PCR为例)四、方法(以不对称螺旋管芯片微流控PCR为例)五、应用六、小结第四节连续流热梯度PCR一、引言二、原理三、材料四、操作方法五、注意事项六、应用七、小结第五节PCR芯片的应用一、引言二、应用240三、注意事项242四、小结243参考文献243第十章数字PCR实验方法245节数字PCR概述245一、引言245二、数字PCR系统分类247第二节数字PCR技术关键点分析249一、PCR微流控芯片249二、连续流PCR微流控芯片251三、微滴PCR技术252四、微阀、微泵和微混合器与PCR微流控芯片的关系255五、dPCR与液滴微流控芯片的结合和应用256第三节数字PCR的应用257一、在突变检测方面的应用257二、病毒载量的定量操作方法271参考文献277十章核酸恒温扩增技术的原理、方法及应用278节聚合酶螺旋扩增技术的原理、方法及应用280一、基本原理280二、方法281三、结果分析286四、注意事项289五、小结289第二节环介导等温扩增技术的原理、方法及应用289一、基本原理290二、方法292三、结果分析299四、注意事项302五、应用302六、小结302第三节重组酶聚合酶扩增技术的原理、方法及应用304一、基本原理304二、器材306三、实验方法306四、结果分析309五、注意事项311六、应用312七、小结313参考文献313第十二章PCR方法316节高(G+C)含量DNA的PCR扩增316一、使用剂改善高(G+C)含量DNA模板的PCR扩增317二、NaOH对模板进行预处理改善高(G+C)含量DNA的PCR扩增320三、利用高温PCR体系改善高(G+C)含量DNA模板的PCR扩增321四、应用322五、小结322第二节长片段PCR3一、引言3二、原理3三、材料3四、方法324五、注意事项325六、应用327七、小结329第三节利用热激活物行热启动PCR330一、引言 330二、原理330三、材料331四、方法331五、注意事项333六、应用333七、小结336第四节融合PCR337一、引言337二、融合PCR的原理337三、应用于基因插入的融合PCR的具体操作步骤337四、融合PCR的应用338五、融合PCR操作方法的注意事项341六、小结343第五节不依赖连接反应的克隆PCR343一、引言343二、基本原理343三、材料345四、方法346五、注意事项346六、应用346第六节菌落PCR348一、引言348二、原理348三、材料349四、操作方法349五、注意事项349六、应用349七、小结350参考文献350第十三章PCR在基因分型中的应用353节任意引物PCR353一、引言353二、任意引物PCR的基本原理及技术特点353三、AP-PCR 方法354四、RAP-PCR方法355五、注意事项356六、应用356七、小结361第二节通用PCR361一、引言361二、原理361三、材料362四、方法362五、注意事项363六、应用364七、小结365第三节rep-PCR365一、引言365二、原理366三、材料366四、方法366五、注意事项369六、应用370七、小结372第四节序列特异引物PCR372一、引言372二、原理373三、材料373四、方法373五、注意事项376六、应用与小结376第五节简单序列重复区间PCR376一、引言376二、原理377三、材料377四、方法378五、注意事项379六、应用379七、小结380第六节钳制PCR380一、引言380二、原理380三、材料381四、方法381五、注意事项382六、应用382第七节序列特异寡核苷酸多态PCR382一、原理382二、试剂383三、方法384四、注意事项387五、应用388参考文献389第十四章PCR在临床诊断及流行病调查中的应用394节表位特异PCR394一、引言394二、原理394三、材料394四、方法395五、应用395六、小结395第二节双标记PCR396一、引言396二、原理396三、材料396四、方法397五、应用397六、注意事项397第三节降落PCR397一、引言397二、原理398三、材料398四、方法398五、降落PCR与常规PCR的比较399六、应用401七、小结402第四节16S rRNA PCR402一、引言402二、原理402三、材料及设备403四、方法403五、注意事项405六、应用405七、小结407第五节PCR偶联连接酶链式反应407一、原理407二、材料408三、方法409四、注意事项410五、应用411第六节快速PCR412一、引言412二、原理412三、实验方法414四、应用416五、小结417第七节稀有限制位点PCR418一、引言418二、原理418三、材料420四、方法420五、注意事项421六、应用422七、小结422参考文献4第十五章PCR在法医学中的应用426节小卫星可变重复序列PCR426一、引言426二、原理427三、方法428四、应用431五、小结433第二节短串联重复序列的PCR433一、引言433二、原理434三、材料435四、方法436五、注意事项440六、应用441七、小结442第三节单核苷酸多态PCR444一、引言444二、原理445三、材料及方法447四、SNP-PCR检测方法448五、数据库451六、应用452七、小结454第四节全基因组PCR455一、引言455二、全基因组PCR的种类455三、基因组DNA模板的制备460四、不同WGA方法的比较461五、WGA的产物分析及应用461六、小结464第五节单分子PCR464一、引言464二、原理465三、材料465四、方法465五、注意事项465六、SM-PCR的应用466七、小结467参考文献467第十六章PCR在癌症诊断中的应用474节甲基化特异PCR474一、引言474二、基本原理474三、材料475四、方法475五、注意事项477六、应用478七、小结479第二节差异显示PCR479一、引言479二、原理480三、方法481四、应用484五、小结487第三节PCR-单链构象多态47一、原理487二、材料488三、方法488四、注意事项490五、应用491第四节单细胞PCR492一、引言492二、基本原理493三、材料和方法493四、注意事项497五、应用498六、小结498第五节PCR检测肿瘤细胞端粒酶活49一、引言498二、基本原理499三、材料499四、方法500五、注意事项501六、应用502七、小结与展望502参考文献503第十七章PCR在动物学中的应用507节微卫星PCR在动物分类和进化中的应用507一、引言507二、基本原理507三、材料508四、方法508五、注意事项509六、应用509七、小结510第二节巢式PCR在动物疾病诊断中的应用510一、引言510二、基本原理510三、材料511四、方法511五、注意事项512六、应用512七、小结513第三节T接头介导PCR在转基因动物外源基因定位中的应用513一、引言513二、原理513三、材料514四、方法514五、注意事项515六、应用516七、小结516第四节等温扩增技术在动物学中的应用516一、引言516二、基本原理516三、材料518四、方法519五、注意事项520六、应用520七、小结521参考文献521第十八章PCR技术在基因修饰动物研究中的应用5节PCR技术在基因修饰动物基因型鉴定中的应用5一、引言5二、基本原理524三、材料524四、方法524五、注意事项526第二节PCR技术用于转基因动物细胞中外源基因整合位点的分析526一、方案一:反向PCR527二、方案二:连接介导PCR法528三、方案三:热不对称交错PCR529第三节PCR技术用于转基因动物细胞中外源基因整合拷贝数的分析532一、方案一:实时荧光定量PCR比较CT法检测转基因动物中外源基因的拷贝数532二、方案二:实时荧光定量PCR标准曲线定量法检测转基因动物中外源基因的拷贝数534三、方案三:利用微滴数字PCR分析转基因动物中外源基因的拷贝数535参考文献537第十九章实时荧光定量PCR在动物疫病定量检测中的应用538节实时荧光定量PCR在大家畜(猪、牛、羊)传染病中的诊断应用538一、引言538二、原理538三、器材540四、方法540五、注意事项541六、应用543七、小结545第二节实时荧光定量PCR在家禽传染病(禽流感)中的诊断应用545一、引言545二、原理546三、材料547四、方法547五、结果分析548六、注意事项548七、应用549八、小结550第三节实时荧光定量PCR在水生动物疫病定量检测中的应用550一、引言550二、基本原理550三、材料550四、方法551五、注意事项552六、应用552七、小结554参考文献555第二十章PCR在植物学中的应用557节ISSR-PCR在植物分类学中的应用557一、引言557二、基本原理557三、材料557四、方法558五、注意事项559六、应用559七、小结566第二节TAIL-PCR在转基因植物研究中的应用567一、引言567二、基本原理567三、材料568四、方法568五、注意事项569六、应用570七、小结575第三节多重PCR在植物基因检测中的应用575一、引言575二、基本原理576三、多重PCR的实验方法576四、多重PCR设计方法及注意事项577五、多重PCR在植物生物学研究中的应用579六、多重PCR应用前景580参考文献580
王恒樑,军事科学院军事医学院物工程研究所副所长、研究员,病原微生物生物安全重点实验室副主任,博士生导师。一直从事病原细菌致病机理和基因工程疫苗研究。曾获自然科学杰出青年、特殊津贴、科协求是杰出青年奖、科技部和盖茨联合颁发首届“大挑战2015·青年科学家”,入选百千万人才工程,获“有突出贡献中青年专家”称号。
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