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全新实时荧光PCR技术李金明 主编9787030498274
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章临床PCR技术的发展历史及趋势(1)节PCR的起源和耐热DNA聚合酶的应用(1)一、PCR的起源(1)二、耐热DNA聚合酶的应用(2)第二节PCR的基本原理(3)第三节PCR的反应动力学(5)第四节PCR的扩增体系和扩增条件(5)一、PCR扩增体系的基本要素(5)二、PCR的标准扩增体系(8)三、PCR扩的增剂(9)四、降落PCR(9)五、热启动PCR(10)六、COLDGPCR(10)七、PCR扩增结果分析(11)第五节PCR的特点(12)一、高特异(12)二、高灵敏度(12)三、简便快速(12)四、特定的低纯度标本也可使用(12)第六节PCR的发展(12)参考文献(13)第2章实时荧光PCR技术的基本原理和方法(14)节发展历程(14)第二节基本原理(15)一、PCR扩增的理论模式(15)二、实时荧光PCR的理论基础(16)三、TaqMan实时荧光PCR的基本原理(17)四、双链DNA交联荧光染料实时荧光PCR的基本原理(19)五、双杂交探针实时荧光PCR的基本原理(20)六、分子信标实时荧光PCR的基本原理(20)七、蝎形探针实时荧光PCR的基本原理(21)八、数字实时荧光PCR的基本原理(24)第三节引物、探针的特点及设计软件(26)一、引物的特点(26)二、探针的特点(26)三、引物和探针设计软件(27)第四节多重实时荧光PCR(28)参考文献(28)第3章临床PCR实验室的设计及质量管理体系的建立(30)节实验室的分区规划设计(30)一、标本的接收(30)二、实验室分区设计的一般原则及工作流程(31)第二节实验室质量管理体系的建立(39)一、实验室质量管理概述(39)二、实验室质量管理的特点(41)三、质量体系文件的编写(42)第三节实验室的记录管理(56)一、记录的种类(56)二、记录的标识(56)三、记录的填写(57)四、记录的封面和目录(59)五、记录的良好保存(59)六、记录的保存期限(59)七、过期记录的处理(59)八、记录表格样式的持续改进(59)九、记录的管理(60)第四节实验室验收与实验室认可(60)一、实验室认可的由来及目的(60)二、实验室认可与认的区别(61)三、实验室验收与实验室认可的关系(61)参考文献(62)第4章临床PCR检验标本的采集、运送、保存及核酸提取(63)节标本采集、运送、保存(63)一、标本采集(63)二、标本运送(65)三、标本保存(65)第二节常见临床标本的处理和保存(66)一、血清(浆)样本(66)二、全血样本(66)三、外周血单个核细胞(66)四、痰(66)五、棉拭子(67)六、脓液(67)七、体液(68)八、乳汁(68)九、组织(69)第三节临床标本中PCR抑制物(70)一、临床标本中PCR抑制物的来源及作用机制(70)二、几种常见抑制物的作用机制及对策(70)第四节核酸的提取方法(72)一、DNA提取的经典方法(72)二、RNA的提取(73)三、核酸提取的改良方法(74)参考文献(78)第5章实时荧光PCR测定的数据处理(83)节基本概念(83)第二节实时荧光PCR外标保定量的数学模型(85)一、基本计算公式的推导(85)二、纵坐标为起始拷贝数对数值横坐标为Ct时的数学模型(85)三、纵坐标为Ct横坐标为起始拷贝数时的数学模型(86)第三节实时荧光PCR相对定量的数学模型(87)一、相对定量的标准曲线法(87)二、2-ΔΔCt法(89)三、2-ΔΔCt的改良方法(89)四、多重PCR法(91)第四节用曲线拟合的方法进行数据处理(92)一、Liu与Saint的方法(92)二、Ramakers等的方法(92)三、Tichopad等的方法(92)参考文献(93)第6章实时荧光PCR仪及其发展(94)节PCR仪的发展历史及基本原理(94)一、空气驱动循环PCR仪(94)二、变温金属块PCR仪(95)第二节实时荧光PCR仪简介(95)一、美国ABI公司生产的实时荧光PCR仪(95)二、美国Cepheid公司的SmartCycler实时荧光PCR仪(98)三、美国BioGRad公司的实时荧光PCR仪(99)四、美国Stratagene公司的实时荧光PCR仪(100)五、Roche公司的LightCycler实时荧光PCR仪(101)六、Corbert的RotorGene实时荧光PCR仪(103)七、Eppendorf公司的Mastercyclereprealplex实时荧光PCR仪(104)第三节实时荧光PCR仪选择(104)一、仪器使用的广泛程度(104)二、工作量(104)三、耗材的开放(105)四、硬件设计特点(105)五、检测通道和可检测的荧光染料(105)六、温度梯度功能(105)七、软件功能(105)第四节数字PCR仪简介(106)、微控芯片数字PCR(107)二、液滴数字PCR(107)第五节实时荧光PCR仪的使用、维护和校准(108)一、实时荧光PCR仪使用中的注意事项(108)二、维护和校准(108)参考文献(111)第7章临床PCR检验仪器设备的使用、维护和校准(112)节天平(112)一、分析天平及其分类(112)二、天平的正确使用(113)三、天平的选择(114)四、天平的维护和校准(114)第二节离心机(115)一、离心机离心的基本原理(115)二、离心力和相对离心力(116)三、离心时间(116)四、离心转子的选择(119)五、离心管(119)六、离心机的分类(119)七、离心机的使用和维护(120)第三节微量加样器(122)一、微量加样器的一般原理及分类(122)二、加样器的选择及使用(1)三、加样器的维护和校准(129)参考文献(133)第8章临床PCR检验的质量保(134)节概述(134)一、基本概念(134)二、质量保室内质量控制和室间质量评价之间的关系(136)三、标本采集、运送、保存及其质量控制(136)第二节室内质量控制(137)一、测定前质量控制(137)二、核酸样本的制备、扩增检测及其质量控制(144)三、统计学质量控制(146)第三节室间质量评价(160)一、室间质量评价的程序设计(161)二、室间质量评价的局限(164)参考文献(165)第9章病毒核酸检测的标准物质及其应用(167)节概述(167)一、基本概念(167)二、病毒核酸检测用标准物质的种类和溯源关系(169)第二节病毒核酸检测用标准物质的制备(170)一、原材料的选择和分装(171)二、均匀和稳定(172)三、定值(174)四、标准物质的保存(175)五、核酸检测用标准物质的意义(175)六、核酸检测用标准物质的展望(176)参考文献(179)0章甲型肝炎病毒实时荧光PCR检测及临床意义(182)一、H的特点(182)二、HRNA实时荧光RTGPCR检测(182)三、HRNA检测的临床意义(185)参考文献(186)1章乙型肝炎病毒实时荧光PCR检测及临床意义(187)一、HBV的特点(187)二、HBVDNA实时荧光PCR测定(190)三、HBV变异的检测及其临床意义(196)四、HBVcccDNA的检测及其临床意义(200)五、HBV基因型的检测及其临床意义(201)六、HBVRNA的检测及其临床意义(204)七、HBV全基因组测定及其临床意义(205)参考文献(206)2章丙型肝炎病毒实时荧光RTGPCR检测及临床意义(210)一、HCV的形态和基因组结构特点(210)二、HCV的复制特点(211)三、HCV的变异特点及基因型(211)四、HCVRNA实时荧光RTGPCR测定(212)五、HCV基因分型检测及其临床意义(220)参考文献(2)3章人免疫缺陷病毒G1实时荧光RTGPCR检测及临床意义(226)一、HIVG1的特点(226)二、HIVG1RNA的实时荧光RTGPCR测定(227)三、HIVG1RNA测定的临床意义(4)参考文献(5)4章人瘤病毒实时荧光PCR检测及临床意义()一、HPV的形态和基因结构特点()二、HPV的体内复制特点()三、病毒的变异特点()四、HPV基因型(240)五、HPVDNA的实时荧光PCR测定(240)六、HPVDNA检测的临床意义(248)参考文献(250)5章巨细胞病毒实时荧光PCR检测及临床意义(253)一、人类巨细胞病毒的特点(253)二、人类巨细胞病毒实时荧光PCR测定(254)三、巨细胞病毒PCR检测的临床意义(267)参考文献(268)6章严重急呼吸综合征实时荧光RTGPCR检测及临床意义(269)一、SARSGCoV的特点(269)二、SARSGCoVRNA实时荧光RTGPCR检测(270)三、SARSGCoVPCR检测的临床意义(286)参考文献(286)7章EB病毒实时荧光PCR检测及临床意义(288)一、EB病毒的特点(288)二、EB病毒实时荧光PCR测定(289)三、EB病毒PCR检测的临床意义(294)参考文献(295)8章流感病毒实时荧光RTGPCR检测及临床意义(296)、感病毒的特点(296)二、流感病毒的实时荧光RTGPCR测定(298)三、流感病毒RTGPCR检测的临床意义(320)参考文献(320)9章风疹病毒实时荧光RTGPCR检测及临床意义(321)一、风疹病毒的形态和基因组结构及功能特点(321)二、风疹病毒的复制特点(322)三、风疹病毒的变异特点及基因型(3)四、风疹病毒实时荧光RTGPCR测定及其临床意义(3)参考文献(330)第20章麻疹病毒实时荧光RTGPCR检测及临床意义(332)一、麻疹病毒的形态和基因组结构及功能特点(332)二、麻疹病毒的复制特点(334)三、麻疹病毒的变异特点及基因型(335)四、麻疹病毒实时荧光RTGPCR测定及其临床意义(335)参考文献(339)2章手足口病病原体实时荧光RTGPCR检测及临床意义(341)一、手足口病病原体的形态和基因组结构特点(341)二、手足口病病原体复制特点(341)三、手足口病病原体实时荧光RTGPCR测定及其临床意义(342)四、手足口病病原体检测及其临床意义(349)参考文献(349)第22章埃博拉病毒实时荧光定量RTGPCR检测及临床意义(351)一、EBOV的形态和基因组结构特点(351)二、EBOV的基因分型(352)三、EBOVRNA实时荧光RTGPCR测定及其临床意义(352)参考文献(360)第章中东呼吸综合征实时荧光RTGPCR检测及临床意义(361)一、MERSGCoV的形态和基因组结构特点(361)二、MERSGCoV的感染过程(362)三、MERSGCoVRNA实时荧光RTGPCR测定及其临床意义(363)参考文献(379)第24章沙眼衣原体实时荧光PCR检测及临床意义(381)一、沙眼衣原体的形态和基因组结构特点(381)二、沙眼衣原体的实时荧光PCR测定(381)三、沙眼衣原体PCR检测的临床意义(391)参考文献(391)第25章结核杆菌实时荧光PCR检测及临床意义(394)一、结核杆菌的特点(394)二、结核杆菌实时荧光PCR检测(395)三、结核杆菌PCR检测的临床意义(405)参考文献(406)第26章淋病奈瑟菌实时荧光PCR检测及临床意义(407)一、淋病奈瑟菌的特点(407)二、淋病奈瑟菌实时荧光PCR测定(408)三、淋病奈瑟菌PCR检测的临床意义(418)参考文献(419)第27章幽门螺杆菌实时荧光PCR检测及临床意义(420)一、幽门螺杆菌的特点(420)二、幽门螺杆菌实时荧光PCR测定(421)三、幽门螺杆菌PCR检测的临床意义(430)参考文献(430)第28章肺炎支原体实时荧光PCR检测及临床意义(432)一、肺炎支原体的结构特点(432)二、肺炎支原体的实时荧光PCR检测(432)三、肺炎支原体PCR检测的临床意义(437)参考文献(437)第29章刚地弓形虫实时荧光PCR检测及临床意义(438)一、刚地弓形虫的特点(438)二、刚地弓形虫的实时荧光PCR检测(439)三、刚地弓形虫PCR检测的临床意义(444)参考文献(444)第30章解脲支原体实时荧光PCR检测及临床意义(446)一、解脲支原体的特点(446)二、解脲支原体实时荧光PCR检测(446)三、解脲支原体PCR检测的临床意义(451)参考文献(452)3章EGFR基因实时荧光PCR检测及临床意义(453)一、EGFR基因特点及常见突变类型(453)二、相关靶向治疗药物(454)三、EGFR基因突变实时荧光PCR测定及其临床意义(455)参考文献(463)第32章KRAS基因实时荧光PCR检测及临床意义(466)一、KRAS基因特点及常见突变类型(466)二、KRAS基因突变实时荧光PCR测定及其临床意义(466)参考文献(477)第33章BRAF基因突变的实时荧光PCR检测及临床意义(479)一、BRAF的基因组结构特点(479)二、BRAF基因突变实时荧光PCR测定及其临床意义(480)参考文献(484)第34章PIK3CA基因突变实时荧光PCR检测及临床意义(486)一、PIK3CA的基因结构特点(486)二、PIK3CA基因突变实时荧光PCR测定及其临床意义(487)参考文献(497)
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