结核病实验室检测与图解 主编卢洪洲,钱雪琴,黄海荣,主审翁心华,赵雁林 著 生活 文轩网

章 结核病概述 一、 结核病的历史 .........................................................................................................1 二、 结核病的流行病学及宿主易感因素 .....................................................................2 三、 结核病相关的疫苗研究 .........................................................................................3 四、 结核病的临床表现 .................................................................................................4 五、 结核病的诊断 .........................................................................................................5 六、 结核病的治疗 .........................................................................................................5 第二章 结核病实验室安全防护 一、 实验室存在的危险 .................................................................................................7 二、 实验室设施和设备要求 .........................................................................................8 三、 实验室设计原则及基本要求 .................................................................................8 四、 个人防护 .................................................................................................................9 五、 进入实验室的要求 .................................................................................................9 六、 实验室操作要求 .....................................................................................................9 七、 实验室常用设备的正确使用和意外处理 ...........................................................10 八、 常用消毒杀菌方法 ................................................................................................11 第三章 分枝杆菌特性 节  结核分枝杆菌的生物学特性 ...................................................................................13 一、 染色与形态 ...........................................................................................................14 二、 培养特性 ...............................................................................................................15 三、 生化反应 ...............................................................................................................16 四、 变异性 ...................................................................................................................16 五、 抵抗力与消毒 .......................................................................................................17 第二节  非结核分枝杆菌的生物学特性 ...............................................................................17 一、 分类 .......................................................................................................................18 二、 形态 .......................................................................................................................18 三、 培养特性 ...............................................................................................................18 四、 致病性 ...................................................................................................................19 五、 药物敏感性 ...........................................................................................................19 六、 常见非结核分枝杆菌 ...........................................................................................19 第四章 临床送检标本采集、运送和保存 一、 呼吸道标本的采集 ...............................................................................................23 二、 肺外标本的采集 ...................................................................................................25 三、 标本采集注意事项、运送及保存 .........................................................................26 第五章 抗酸杆菌涂片、染色及显微镜检查 节  抗酸杆菌涂片处理方法及局限性分析 ...................................................................28 一、 概述 .......................................................................................................................28 二、 涂片镜检的优缺点 ...............................................................................................28 三、 直接涂片法 ...........................................................................................................29 四、 漂浮集菌法 ...........................................................................................................30 五、 离心沉淀法 ...........................................................................................................31 六、 消化后离心沉淀法 ...............................................................................................31 七、 涂片注意事项 .......................................................................................................35 第二节  抗酸染色及显微镜检查 ............................................................................................36 一、 萋—尼抗酸染色 .....................................................................................................36 二、 改良萋—尼抗酸染色 .............................................................................................37 三、 Kinyoun抗酸染色.................................................................................................37 四、 潘本汉（Pappenheim）抗酸染色 ..........................................................................38 五、 弱抗酸染色 ...........................................................................................................38 六、 卡贝托（Gabbet）抗酸染色 ..................................................................................39 七、 改良I—K抗酸染色 ................................................................................................39 八、 显微镜镜检 ...........................................................................................................40 九、 结果判断 ...............................................................................................................40 十、 结果判读 ...............................................................................................................40 十一、 痰涂片抗酸杆菌浓度与涂阳概率 ...................................................................40 十二、 读片时间与镜检阳性率的关系 .......................................................................41 十三、 不同离心力对涂片镜检及培养结果的影响 ...................................................41 十四、 标本中不同抗酸杆菌抗酸染色形态汇总 .......................................................41 第三节  荧光染色及显微镜检查 ............................................................................................45 一、 原理及特点 ...........................................................................................................45 二、 LED荧光显微镜与传统荧光显微镜比较 ...........................................................46 三、 金胺O染色 ...........................................................................................................46 四、 金胺O—罗丹明染色 ..............................................................................................47 五、 镜检 .......................................................................................................................47 六、 结果判断 ...............................................................................................................47 七、 结果判读 ...............................................................................................................47 八、 荧光染色优越性 ...................................................................................................48 九、 荧光染色局限性 ...................................................................................................48 十、 标本中不同抗酸杆菌荧光染色形态汇总 ...........................................................49 第四节  质量控制 .....................................................................................................................54 一、 室内质控 ...............................................................................................................54 二、 室间比对 ...............................................................................................................55 三、 注意事项 ...............................................................................................................55 第五节  抗酸杆菌涂片假阳性、假阴性原因分析及处理措施 ...........................................55 一、 假阳性原因分析及预防措施 ...............................................................................55 二、 假阴性原因分析及预防措施 ...............................................................................56 第六章 分枝杆菌培养 节  分枝杆菌培养概述 ....................................................................................................59 一、 概述 .......................................................................................................................59 二、 不同化学物质对分枝杆菌的生长影响 ...............................................................59 第二节  临床标本前处理方法 ................................................................................................61 一、 概述 .......................................................................................................................61 二、 分枝杆菌培养去污染方法 ...................................................................................62 第三节  分枝杆菌培养基种类及介绍 ...................................................................................67 一、 概述 .......................................................................................................................67 二、 商品化快速培养、药敏检测系统 .........................................................................67 三、 液体变色培养基 ...................................................................................................68 四、 固体培养基 ...........................................................................................................68 五、 双相培养基 ...........................................................................................................69 六、 常用培养基成分介绍 ...........................................................................................69 第四节  分枝杆菌固体培养操作程序 ...................................................................................71 一、 试剂、培养基与耗材 .............................................................................................71 二、 标本前处理 ...........................................................................................................72 三、 标本接种 ...............................................................................................................73 四、 结果观察 ...............................................................................................................74 五、 报告方式 ...............................................................................................................74 六、 注意事项 ...............................................................................................................74 七、 室内质控 ...............................................................................................................75 八、 罗氏培养基上结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌、诺卡菌及常见 污染杂菌菌落及镜检形态汇总 ..........................................................................76 第五节  BACTEC MGIT 960 System全自动分枝杆菌检测/ 药敏系统操作程序 ....................................................................................................89 一、 概况及检测原理 ...................................................................................................89 二、 仪器硬件系统 .......................................................................................................89 三、 实验准备 ...............................................................................................................90 四、 标本前处理 ...........................................................................................................90 五、 标本接种 ...............................................................................................................91 六、 结果报告 ...............................................................................................................91 七、 质量控制 ...............................................................................................................91 八、 仪器状态检查及保养 ...........................................................................................92 九、 检测局限性 ...........................................................................................................92 十、 BACTEC MGIT 960 System培养结核分枝杆菌、非结核分枝 杆菌、诺卡菌及常见污染杂菌菌落及镜检形态汇总 ........................................93 第六节  BACTEC 9120全自动血培养仪 ..........................................................................98 一、 原理 .......................................................................................................................98 二、 标本培养检测的操作步骤 ...................................................................................98 三、 报警及错误处理 ...................................................................................................99 四、 仪器报阳瓶处理 .................................................................................................101 五、 结果报告 .............................................................................................................101 六、 质量控制 .............................................................................................................101 七、 注意事项 .............................................................................................................102 八、 BACTEC 9120培养结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌镜检形态汇总 ..............103 第七节  分枝杆菌培养报阳后标本的处理 .........................................................................105 一、 BACTEC MGIT 960报阳后标本的处理 ...........................................................105 二、 血培养报阳后标本的处理 .................................................................................106 三、 罗氏培养阳性菌株转种方法推荐 .....................................................................106 四、 罗氏培养阳性菌株涂片方法推荐 .....................................................................107 第八节  分枝杆菌培养结果影响因素分析 .........................................................................107 一、 假阳性原因分析及处理措施 .............................................................................107 二、 假阴性原因分析及处理措施 .............................................................................108 三、 分枝杆菌培养注意事项 .....................................................................................109 四、 不同培养基培养分枝杆菌敏感性差异比较 .....................................................109 五、 提高分枝杆菌培养检出率的方法 .....................................................................109 第七章 分枝杆菌菌种鉴定 节  传统鉴定方法及局限性介绍 ..................................................................................111 一、 结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌的区别 ..........................................................111 二、 结核分枝杆菌和牛分枝杆菌鉴定 ......................................................................113 三、 偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌和脓肿分枝杆菌鉴定 ............................................114 四、 分枝杆菌鉴定流程图 ..........................................................................................115 第二节  分枝杆菌免疫学检查 ...............................................................................................115 一、 PPD结核菌素皮肤试验介绍及局限性分析 ......................................................115 二、 γ干扰素释放试验（IGRA） ..................................................................................116 三、结核抗原检测及局限性 .....................................................................................121 四、 四、 结核抗体检测及局限性 .....................................................................................123 第八章 分枝杆菌核酸检测及局限性分析 节  结核分枝杆菌复合群分子鉴定 .............................................................................125 一、 用于结核分枝杆菌复合群鉴定的DNA序列 ...................................................125 二、 用于结核分枝杆菌复合群鉴定的技术 .............................................................126 第二节  非结核分枝杆菌菌种分子鉴定 .............................................................................128 一、 用于非结核分枝杆菌菌种分子鉴定的DNA序列 ...........................................128 二、 用于非结核分枝杆菌菌种分子鉴定的技术 .....................................................129 第三节  结核分枝杆菌耐药性分子检测 .............................................................................130 一、 用于结核分枝杆菌耐药性分子检测的DNA序列 ...........................................130 二、 用于结核分枝杆菌耐药性分子检测的技术 .....................................................131 第九章 MALDI—TOF MS技术在分枝杆菌鉴定中的应用 节  MALDI Biotyper在分枝杆菌鉴定中的应用.....................................................142 一、 基本原理与流程 .................................................................................................142 二、 在分枝杆菌鉴定中的应用 .................................................................................144 第二节  VITEK MS在分枝杆菌鉴定中的应用 ................................................................148 一、 方法及原理 .........................................................................................................148 二、 样本处理方法 .....................................................................................................148 三、 结果判读 .............................................................................................................150 四、 操作及结果判读注意事项 .................................................................................150 第十章 抗分枝杆菌药物及作用特点 节  抗结核分枝杆菌药物及作用特点 .........................................................................151 一、 异烟肼 .................................................................................................................152 二、 乙胺丁醇 .............................................................................................................152 三、 吡嗪酰胺 .............................................................................................................153 四、 利福霉素类 .........................................................................................................154 五、 氨基糖苷类 .........................................................................................................155 六、 卷曲霉素 .............................................................................................................156 七、 对氨基水杨酸 .....................................................................................................156 八、 氯法齐明 .............................................................................................................157 九、 乙硫异烟胺、丙硫异烟胺 ...................................................................................157 十、 环丝氨酸 .............................................................................................................157 十一、 氟喹诺酮类 .....................................................................................................158 十二、 利奈唑胺 .........................................................................................................159 十三、 贝达喹啉 .........................................................................................................159 第二节  抗非结核分枝杆菌药物及作用特点 .....................................................................160 一、 大环内酯类 .........................................................................................................160 二、 四环素类 .............................................................................................................161 三、 磺胺类 .................................................................................................................162 四、 β—内酰胺类 .........................................................................................................162 五、 小结 .....................................................................................................................163 第十一章 结核分枝杆菌耐药性及耐药机制 节 结核分枝杆菌耐药性 ..........................................................................................167 一、 概述 ................................................................................................................167 二、 耐药特点 ........................................................................................................167 第二节  结核分枝杆菌耐药机制 ......................................................................................168 一、 概述 ................................................................................................................168 二、 固有性耐药 ....................................................................................................169 三、 获得性耐药 ....................................................................................................171 四、 其他机制 ........................................................................................................173 五、 系统生物学 ....................................................................................................174 六、 小结 ................................................................................................................174 第十二章 分枝杆菌药物敏感性表型检测 节  结核分枝杆菌的表型药敏试验 .........................................................................178 一、 固体药敏试验 ................................................................................................179 二、 液体培养基药敏试验 ....................................................................................180 三、 其他类型的表型药敏试验方法 ....................................................................181 四、 表型药敏试验的技术局限性 ........................................................................183 第二节  结核分枝杆菌药敏试验操作 .............................................................................185 一、 目的 ................................................................................................................185 二、 处理原则 ........................................................................................................185 三、 比例法固体药敏试验 ....................................................................................185 四、 液体药敏试验 ................................................................................................187 五、 质量控制 ........................................................................................................188 六、 实验后的处理 ................................................................................................189 七、 注意事项 ........................................................................................................189 第三节 非结核分枝杆菌表型药敏试验 .........................................................................190 结核病实验室检测与图解 一、 NTM药敏试验方法 .......................................................................................192 二、 NTM不同菌种药敏试验方法 .......................................................................193 第四节  Sensititre结核分枝杆菌/非结核分枝杆菌药敏试验介绍 ........................198 一、 方法原理 ........................................................................................................198 二、 适用范围 ........................................................................................................198 三、 样本要求 ........................................................................................................199 四、 仪器设备 ........................................................................................................199 五、 试剂耗材 ........................................................................................................199 六、 操作步骤 ........................................................................................................199 七、 质量控制 ........................................................................................................201 八、 检验方法的局限性 ........................................................................................205 九、 注意事项 ........................................................................................................205 十、 临床意义 ........................................................................................................205 附件一：菌落计数程序 ........................................................................................206 附件二：药敏板药物分布表 ................................................................................206 第十三章 重要培养基配制 节  固体培养基的配制 ..............................................................................................209 一、 中性罗氏培养基 ............................................................................................209 二、 酸性罗氏培养基 ............................................................................................210 三、 丙酮酸钠罗氏培养基 .....................................................................................211 四、 小川（Ogawa）培养基 ....................................................................................212 五、 苏通（Sauton）培养基 ....................................................................................212 六、 Middlebrook 7H10与7H11琼脂培养基 .......................................................212 七、 ATS培养基（American Trudeau Society）用于分枝杆菌培养 .....................214 八、 改良TSA—L培养基（适用于L型分枝杆菌培养） ........................................214 第二节  液体培养基配制 ..................................................................................................215 一、 Middlebrook 7H9液体培养基 .......................................................................215 二、 液体Dubos培养基 .........................................................................................217 三、 改良柯尔施纳（Kirschner）培养基 ................................................................218 四、 改良普罗斯考尔（Pros—Kaur和Beck）培养基 .............................................218 五、 92—3 TB—L液体培养基 .................................................................................218 六、 92—3 TB—B液体培养基配方 .........................................................................219 第三节  固体鉴定培养基的配制 ......................................................................................219 一、 对硝基苯甲酸（PNB）罗氏培养基 ................................................................219 二、 噻吩—2—羧酸肼（TCH）罗氏培养基 .............................................................220 三、 苦味酸培养基 ................................................................................................220 四、 谷氨酸钠琼脂培养基 ....................................................................................221 五、 5%的氯化钠罗氏培养基 ...............................................................................221 第四节  固体药敏培养基的配制 ......................................................................................222 一、 固体药敏培养基 ............................................................................................222 二、 吡嗪酰胺药敏培养基 ....................................................................................224 第五节  液体药敏培养基的配制 ......................................................................................225 一、 培养基制备 ....................................................................................................225 二、 质量控制 ........................................................................................................226 三、 注意事项 ........................................................................................................226 附录一 菌株保存 228 附录二 分枝杆菌检测参考书介绍 229