音像家蚕微粒子病防控技术鲁兴萌著

目录

前言

绪论  1

篇  家蚕微粒子虫来源及防控技术

章  感染家蚕的微孢子虫  11

1.1  家蚕微粒子虫  11

1.1.1  家蚕微粒子虫的分类简史  11

1.1.2  家蚕微粒子虫的分类地  12

1.1.3  家蚕微粒子虫的分类学特征  12

1.2  家蚕微孢子虫  14

1.2.1  具褶孢虫属（Pleistophora）的分类学特征和地位  15

1.2.2  泰罗汉孢虫属（Thelohania）的分类学特征和地位  16

1..  变形孢虫属（Vairimorpha）的分类学特征和地位  17

1.2.4  内网虫属（Endoreticulatus）的分类学特征和地位  19

1.3  养蚕相关昆虫来源微孢子虫  20

1.3.1  野外昆虫来源微孢子虫  20

1.3.2  野外昆虫来源微孢子虫的分类学研究  21

1.3.3  野外昆虫来源微孢子虫对家蚕的感染  21

1.4  家蚕微粒子虫的生物进化分析  22

1.4.1  基于分子生物学的分类与进化分析  22

1.4.2  家蚕微粒子虫α-和β-微管蛋白部分基因的克隆及系统发育分析  25

1.5  家蚕来源内网虫属样微孢子虫  32

1.5.1  内网虫属样微孢子虫的形态学和感染观察  33

1.5.2  内网虫属样微孢子虫嵊州株rRNA基因序列的研究  36

第2章  家蚕微孢子虫的变异  42

2.1  昆虫微孢子虫的寄主域  42

2.1.1  微孢子虫的寄主专一  42

2.1.2  温度和光照等环境因子对微孢子虫感染的影响  44

2.1.3  家蚕微粒子虫对昆虫的感染及染后的孢子形态变化  45

2.2  家蚕微粒子虫感染桑尺蠖后孢子表面蛋白的变化  50

2.2.1  家蚕微粒子虫与24Nb-H孢子表面蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）比较  51

2.2.2  家蚕微粒子虫与24Nb-H孢子表面蛋白的2-DE比较  51

2..  家蚕微粒子虫与24Nb-H孢子总蛋白的SDS-PAGE比较  53

2.2.4  家蚕微粒子虫与24Nb-H孢子总蛋白的固相2-DE比较  54

2.2.5  孢子表面蛋白与总蛋白的2-DE图谱比较  56

.  家蚕来源内网虫属样微孢子虫嵊州株与Nb孢子表面蛋白的比较  58

..1  内网虫属样微孢子虫嵊州株与Nb孢子表面蛋白的SDS-Urea PAGE比较  59

..2  内网虫属样微孢子虫嵊州株与Nb孢子表面蛋白的固相2-DE比较  59

第3章  养蚕环境中微孢子虫的分布与家蚕微粒子病检测技术  65

3.1  养蚕环境病原微生物的分布  65

3.1.1  取样和检测方法  67

3.1.2  蚕室环境样本的检测  68

3.1.3  不同养蚕技术水平农户不同蚕室环境样本的检出率比较  70

3.1.4  不同养蚕阶段蚕室环境样本的检出率比较  71

3.2  家蚕微粒子病的疫学测技术  73

3.2.1  疫学测技术的特点  74

3.2.2  液氮处理Nb孢子和未处理Nb孢子包被效果的对比  75

3..  纯化Nb孢子的ELISA检测及模拟感染家蚕微粒子病蚕卵的检测  75

3.3  家蚕微粒子病的分子生物学检测技术  79

3.3.1  家蚕微粒子虫孢子的破碎与核酸获取  79

3.3.2  常规PCR检测  87

3.3.3  荧光定量PCR检测  92

3.3.4  蚕种（卵）的家蚕微粒子病检测  96

3.3.5  蚕卵组织对荧光定量PCR检测的影响  102

第二篇  家蚕微粒子虫在个体中扩散及防控技术

第4章  家蚕微粒子虫孢子发芽和入侵细胞  111

4.1  家蚕微粒子虫孢子的发芽  111

4.1.1  家蚕微粒子虫孢子的发芽过程  111

4.1.2  微孢子虫孢子发芽前-后孢内糖的变化  112

4.1.3  环境理化因子对微孢子虫孢子发芽的影响  113

4.2  家蚕微粒子虫孢子发芽相关孢壁蛋白的研究  115

4.2.1  家蚕微粒子虫孢子孢壁蛋白单克隆抗体特异鉴定  116

4.2.2  单克隆抗体对家蚕微粒子虫孢子体外发芽的影响  117

4..  单抗3C2对家蚕微粒子虫孢子感染BmN细胞的影响  118

4.2.4  家蚕微粒子虫孢子表面蛋白SP84的分离纯化及定位  122

4.2.5  家蚕微粒子虫孢子表面蛋白SP84的免疫共沉淀和质谱鉴定  125

4.3  家蚕微粒子虫孢子发芽前-后转录组的差异分析  130

4.3.1  转录组序列拼接和分析  130

4.3.2  基因注释和差异基因表达分析  131

4.3.3  差异表达基因聚类分析和功能富集分析  135

4.3.4  家蚕微粒子虫孢子发芽相关候选基因的预测  137

4.4  家蚕微粒子虫孢子发芽前-后的Label-free蛋白质组学定量分析  139

4.4.1  家蚕微粒子虫孢子发芽前-后蛋白质的Label-free定量色谱分析  139

4.4.2  家蚕微粒子虫孢子发芽前-后鉴定蛋白的GO分析  145

4.4.3  家蚕微粒子虫孢子发芽前-后鉴定蛋白的KEGG分析  148

第5章  家蚕微粒子虫入侵家蚕细胞及繁殖  155

5.1  家蚕微粒子虫与粉纹夜蛾培养细胞的相互作用  156

5.1.1  家蚕微粒子虫孢子接种Tn培养细胞的透电镜观察  156

5.1.2  家蚕微粒子虫孢子接种Tn培养细胞的激光共聚焦显微镜观察  157

5.1.3  家蚕微粒子虫孢子接种Tn培养细胞的孢子和大小测定  159

5.1.4  Tn培养细胞总蛋白和Nb孢壁蛋白的SDS-PAGE分析  160

5.2  家蚕微粒子虫感染家蚕幼虫对部分生理生化指标的影响  162

5.2.1  家蚕微粒子虫感染家蚕幼虫对、中肠和血液蛋白酶活的影响  163

5.2.2  家蚕微粒子虫感染家蚕幼虫对血液和中肠蛋白的影响  166

5..  家蚕微粒子虫感染家蚕幼虫对海藻糖酶活的影响  167

5.3  家蚕微粒子虫孢子母细胞和成熟孢子蛋白差异的比较  168

5.3.1  家蚕微粒子虫孢子生殖阶段细胞的分离  169

5.3.2  孢子母细胞和成熟孢子蛋白的2-DE分析  171

5.3.3  MALDI-TOF/TOF MS分析及数据库搜索  171

5.4  家蚕微粒子虫感染家蚕培养细胞的蛋白质组分析  173

5.4.1  家蚕微粒子虫在BmN培养细胞中的增殖  173

5.4.2  接种Nb孢子BmN细胞培养物的2-DE分析  173

5.4.3  接种Nb孢子BmN细胞培养物差异蛋白点的质谱鉴定  175

5.4.4  接种Nb孢子细胞培养物差异蛋白的生物信息学分析与功能验  176

5.5  家蚕微粒子虫对寄主BmN细胞凋亡的抑制作用  186

5.5.1  微粒子虫感染与家蚕细胞凋亡  187

5.5.2  放线菌素D处理BmN培养细胞的DN段化  190

第6章  家蚕微粒子虫感染家蚕相关基因及功能  198

6.1  家蚕微粒子虫孢子SWP5蛋白基因及功能  198

6.1.1  家蚕微粒子虫孢子蛋白基因的克隆、表达及定位  198

6.1.2  家蚕微粒子虫孢子NbSWP5蛋白在感染过程中的作用  202

6.2  家蚕微粒子虫孢壁蛋白SWP12基因的克隆、表达分析及功能研究  209

6.2.1  家蚕微粒子虫孢子HSWP12蛋白基因的克隆和抗体制备  210

6.2.2  家蚕微粒子虫孢子孢壁蛋白SWP12在细胞中的表达与定位  213

6..  多克隆抗体对家蚕微粒子虫孢子黏附及感染的抑制效果  214

6.3  家蚕微粒子虫蓖麻毒素B凝集素在感染过程的能  215

6.3.1  家蚕微粒子虫蓖麻毒素B凝集素基因的序列分析、表达差异分析和克隆  216

6.3.2  家蚕微粒子虫蓖麻毒素B凝集素对Nb孢子黏附BmN细胞的影响  220

6.3.3  家蚕微粒子虫蓖麻毒素B凝集素对Nb侵染BmN细胞的影响  221

6.4  家蚕微粒子虫Akirin蛋白基因的鉴定与序列分析  2

6.4.1  家蚕微粒子虫感染BmN细胞的基因差异表达  226

6.4.2  家蚕微粒子虫Akirin蛋白基因的克隆和测序分析  1

第7章  家蚕消化道的细菌微生态  

7.1  基于16S rDNA测序的家蚕消化道细菌微生态  

7.1.1  小蚕期家蚕消化道细菌微生态  

7.1.2  5龄期家蚕消化道细菌微生态  241

7.1.3  家蚕消化道细菌微生态的主要特征  248

7.2  健康家蚕消化道肠球菌及多样  255

7.2.1  肠球菌分离菌株表型特征的多样  256

7.2.2  肠球菌的数值鉴定和多样分析  260

7..  基于RAPD技术的家蚕肠球菌多样  263

7.2.4  基于染色体杂交技术的家蚕肠球菌菌种鉴定  264

7.2.5  基于16S rDNA测序的家蚕肠球菌菌种鉴定  268

7.2.6  基质辅激光解吸电离飞行时间质谱鉴定技术  271

7.3  家蚕消化液肠球蛋白  272

7.3.1  家蚕5龄幼虫消化液肠球蛋白的分离纯化与活检测  272

7.3.2  不同家蚕品种的肠球蛋白  274

7.3.3  肠球蛋白的部分特征  275

7.4  家蚕微粒子虫感染对家蚕中肠肠球菌结构的影响  276

7.4.1  肠球菌总数的变化及主要菌属  277

7.4.2  家蚕微粒子虫感染对肠球菌分布的影响  280

第8章  家蚕个体水平防控技术的研究  284

8.1  基于物理因子的蚕种高温浸酸和热空气处理  284

8.2  基于化学因子的家蚕微粒子病防控药物实验  285

8.2.1  几种化学药物对家蚕微粒子病的浓度效应  286

8.2.2  化学药物不同添食方式的治疗效果  287

8..  化学药物对不同剂量微粒子虫孢子感染的治疗效果  288

8.3  微生物因子对家蚕微粒子病发生的影响  289

8.3.1  家蚕消化道来源肠球菌对家蚕微粒子虫孢子发芽的抑制作用  289

8.3.2  肠球菌体外抑制家蚕微粒子虫孢子发芽的动力学研究  292

8.3.3  肠球菌培养物的活物纯化与活测定  296

第三篇  家蚕微粒子虫在饲养群体中扩散及防控技术

第9章  环境来源家蚕微粒子虫的传播规律及防控技术  307

9.1  家蚕微粒子病的流行规律分析  310

9.1.1  蚕种生产量对家蚕微粒子病发生的影响  312

9.1.2  前-后季养蚕对家蚕微粒子病发生的影响  313

9.1.3  不同生产季节对家蚕微粒子病发生的影响  314

9.1.4  不同生产方式对家蚕微粒子病发生的影响  315

9.1.5  客观因素对家蚕微粒子病发生的影响  316

9.2  消毒和生产过程家蚕微粒子病检测等技术措施对其发生的影响  317

9.2.1  家蚕微粒子虫对物理和化学因子的抵抗  318

9.2.2  化学药物对家蚕微粒子虫的杀灭作用  318

9..  预知检查和补正检查  324

9.3  母蛾检测批的规模类型对家蚕微粒子病流行的影响  328

9.3.1  不同母蛾检测批的规模类型数据样本与数据处理  329

9.3.2  母蛾检测批的规模类型变化  329

9.3.3  母蛾检测中未检出和检出合格蚕种的分布规律  332

9.3.4  母蛾检测中淘汰蚕种的分布规律  334

0章  家蚕微粒子虫胚胎感染的传播规律及防控技术  338

10.1  家蚕幼虫期感染与母蛾感染率、感染程度及胚胎感染率的关系  339

10.1.1  家蚕5龄幼虫后期不同浓度家蚕微粒子虫添食感染的母蛾感染率及感染程度  339

10.1.2  家蚕5龄期不同阶段经不同剂量家蚕微粒子虫腔注感染的母蛾感染率  340

10.1.3  感染母蛾的胚胎感染率  343

10.2  原种母蛾检测与一代交蚕农村饲养家蚕微粒子病传染扩散  346

10.2.1  不同家蚕品种的原种母蛾检测  347

10.2.2  不同母蛾检测结果类型一代交蚕的农村饲养  350

10.3  家蚕微粒子虫胚胎感染的传播规律  358

10.3.1  家蚕饲养及胚胎感染母蛾个体样本制作和检测  360

10.3.2  不同家蚕微粒子虫感染程度母蛾所产蚕卵的混育实验  361

10.3.3  个体育实验家蚕微粒子病的检出时相  365

10.4  成品卵的家蚕微粒子

本书包括上篇（家蚕微粒子虫的来源及控制技术）、中篇（家蚕微孢子虫在个体中扩散及控制技术）、下篇（家蚕微孢子虫在饲养群体中扩散及控制技术）和实验方法篇，共计十三章，以及参考文献和附录等。从家蚕微粒子虫是哪里来、如何进入家蚕个体、如何在家蚕饲养群体中扩散的3个维度，在理论研究基础上，开展技术研发的进展等进行了阐述和思考，并提出了家蚕微粒子虫变异机制、胚胎感染的蚕座内连续感染扩散模式，以及病害检疫中基于风险阈值的管理模式等学术观点，期望为后继者的学术研究和产业发展提供有益参考。